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胃癌组织中Bag-1蛋白表达特点及与临床病理学特征

来源:论文帮手 作者: 发布日期:2017-10-21 15:24:42

 胃癌组织中Bag-1蛋白表达特点及与临床病理学特征、预后的关系

 
【摘要】目的:探讨Bc1-2相联系的抗凋亡基因1(Bag-1)蛋白在胃癌组织中的表达及与患者临床病理学特征、预后的关系。方法:选取病理科收集的79例胃癌组织及30例癌旁组织,标本收集时间2010年2月至2013年12月,采用免疫组化SP染色检测两组标本中的Bag-1蛋白表达水平,并分析Bag-1蛋白表达与胃癌患者临床病理学、预后的关系。结果:胃癌组织中的Bag-1蛋白阳性表达率65.82%显著的高于癌旁组织的13.33%(P<0.05);Bag-1蛋白阳性表达的胃癌患者3年生存率30.77%显著的低于阴性表达患者的55.56%(P<0.05);Bag-1蛋白阳性和阴性表达的患者1年以及2年生存率相差不大,差异无统计学意义(P>0.05);Bag-1蛋白阳性表达的胃癌患者3年生存率30.77%显著的低于阴性表达患者的55.56%(P<0.05)。结论:胃癌组织中的Bag-1蛋白高表达,并且与患者的胃癌临床分期和淋巴结转移以及预后有关。
【关键词】Bag-1蛋白;胃癌;病理学特征;预后
 
近年来相关研究显示,胃癌的发病率维持在较高的水平,部分地区的发病率可达233-455/10万人左右[1-2]。临床上胃癌的远期临床预后比较差,患者病死率较高,而通过对于胃癌发病的生物学机制的研究探讨,能够为胃癌的诊断和治疗提供详实的理论基础。越来越多的研究显示,分子生物学水平的改变,可能影响胃癌癌细胞早期增殖异常、凋亡抑制,促进细胞的增殖速度的增加,增加癌细胞早期发生风险[3-4]。Bc1-2相联系的抗凋亡基因1(Bc1-2 related anti apoptosis gene 1,Bag-1)是抗凋亡家族成员,其对于癌细胞转录调控相关基因的抗凋亡作用,能够持续性促进癌细胞早期增殖的风险,增加癌细胞的侵袭或者转移的能力[5-6]。为了进一步揭示Bag-1在胃癌发生发展过程中的作用,本次研究选取病理科收集的79例胃癌组织及30例癌旁组织,揭示了相关指标的异常表达变化,重点分析了相关指标与胃癌患者临床病理特征的关系。详见下文报道。
1 对象与方法
1.1研究对象
选取病理科收集的79例胃癌组织及30例癌旁组织,标本收集时间2010年2月至2013年12月。胃癌组,男41例、女38例,年龄43~77岁,平均62.5±10.4岁,病理分化程度: 16例患者高分化、20例患者中分化、43例患者低分化或未分化,其中49例患者淋巴结转移,临床分期:其中20例TNMⅠ期、27例患者TNMⅡ期、26例患者TNM Ⅲ期、6例患者TNM Ⅳ期;病灶部位:胃窦部32例、胃体部24例、胃底部11例。癌旁组织,男22例、女18例,年龄45~75岁,平均60.9±11.4岁。胃癌组和癌旁组的年龄、性别比较无统计学显著性(P>0.05)。
1.2病例入选标准
1.2.1入选标准(1)胃癌的诊断主要通过腹部超声、CT、超声胃镜检查证实;(2)患者年龄≤79岁;(3)病理学标本来源于术前活检、术后切除组织;(4)既往无放化疗治疗史;(5)基础资料完整能进行统计分析。
1.2.2排除标准(1)患者病理学资料不完整者;(2)发生远处转移的胃癌患者;(3)伴有其他部位恶性肿瘤疾病者。
1.3免疫组化染色
采用石蜡切片脱蜡至水,切片的厚度为3毫米,3%双氧水室温孵育 5 min,通过去离子水冲洗3次(3min/次),用浓度10% 的牛奶蛋白封闭,再室温孵育 5min,然后添加Bag-1蛋白抗体(鼠来源,南京碧云天生物科技有限公司),接着37 ℃ 孵育 2h,采用PBS缓冲液冲洗3次(5min/次),滴加HRP标记的二抗(兔来源,罗氏检测公司),然后37 ℃ 孵育 30 min,采用PBS 冲洗3次(5min/次),最后加入 NBT/BCIP色剂显色 5min,复染,脱水,透明,封片,镜下观察。电子显微镜为上海精密仪器有限公司生产,配套试剂为南京泰康生物科技有限公司生产。
1.4结果判断
计分标准:Bag-1蛋白在细胞核中呈黄色或棕褐色等深色表达,(1)其中褐色及更深的色彩判断为3分、棕黄色判断为2分、淡黄色着色判断为1分、无色判断为0分、;(2)依据阳性染色细胞比例:阳性染色细胞占比达到≤10%判断为1分、阳性染色细胞占比达到11%~50%判断为2分、阳性染色细胞占比达到51%~75%判断为3分、阳性染色细胞占比达到>75%判断为4分,总分<3分判断为阴性、总分≧3分判断为阳性。
1.4统计学方法
本文采用SPSS19.0统计,年龄等资料用( ±s)进行描述;表达率等百分率资料实施χ2检验;P值<0.05说明差异有统计学显著性。
2 结果
2.1两组标本中Bag-1蛋白表达情况比较
胃癌组织中的Bag-1蛋白阳性表达率65.82%显著的高于癌旁组织的13.33%(P<0.05);(表1)。
表1两组标本中Bag-1蛋白表达情况比较
Table1 Comparison of Bag-1 protein expression of specimens in two groups 
Specimen type n - + ++ +++ positive rate(%)
gastric carcinoma 79 27 26 24 2 52(65.82)
adjacent tissue 30 26 4 0 0 4(13.33)
χ2 23.98
P         <0.001
2.2 Bag-1蛋白与患者年龄、性别及其他临床病理特征的关系
经分析, TNM分期越高、发生淋巴结转移的胃癌患者Bag-1蛋白阳性表达率越高(P<0.05),胃癌组织中的Bag-1蛋白阳性表达率与患者的年龄、性别、CEA水平、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度无关(P>0.05);(表2)。
表2患者胃癌组织中Bag-1蛋白表达情况与其临床病理学特征的关系
Table 2 Relationship between Bag-1 protein and clinicopathological features in patients with gastric cancer
Clinicopathological features positiveof Bag-1(n=52) negativeof Bag-1(n=27) χ2 P
n n
age(year) 0.437 0.509
≥60 31 59.62% 14 51.85%
<60 21 40.38% 13 48.15%
Gender 0.913 0.339
Male 29 55.77% 12 44.44%
Female 23 44.23% 15 55.56%
CEA(μg/L) 0.729 0.393
>5.0 34 65.38% 15 55.56%
≤5.0 18 34.62% 12 44.44%
Tumor location 0.995 0.608
Gastric fundus 9 17.31% 3 11.11%
body of stomach 16 30.77% 8 29.63%
Gastric antrum 19 36.54% 13 48.15%
Tumor size 1.606 0.205
<5cm 29 55.77% 11 40.74%
≥5cm 23 44.23% 16 59.26%
Differentiation degree 1.649 0.199
well+moderately 21 40.38% 15 55.56%
poorly 31 59.62% 12 44.44%
Lymph node metastasis 5.383 0.020
Yes 37 71.15% 12 44.44%
No 15 28.85% 15 55.56%
TNM staging 11.235 0.001
stagingⅠ+Ⅱ 24 46.15% 23 85.19%
stagingⅢ+Ⅳ 28 53.85% 4 14.81%
2.2胃癌组织中Bag-1蛋白表达对患者预后的影响
    Bag-1蛋白阳性表达的胃癌患者3年生存率30.77%显著的低于阴性表达患者的55.56%(P<0.05);Bag-1蛋白阳性和阴性表达的患者1年以及2年生存率差异无统计学意义(P>0.05);(表3)。
表3 Bag-1蛋白表达患者的生存率比较
Table 3 Comparison of survival rates in patients with Bag-1 protein expression
Bag-1Protein expression n 1year 2 year 3 year
positive 52 47(90.38) 34(65.38) 16(30.77)
negative 27 25(92.59) 21(77.78) 15(55.56)
χ2 0.107 1.291 4.579
P 0.743 0.256 0.032
3 讨论
胃癌的现阶段临床上总体治疗有效率不足25%,包括手术或者联合放化疗等综合性治疗措施的临床病情缓解率较低[7-8]。同时对于胃癌的早期发病缺乏有效的筛查指标,虽然CA125等上皮肿瘤糖蛋白成分能够在一定程度上提高胃癌的诊断效率[9-10],但其筛查的灵敏度或者特异度等局限性仍然较为明显。本次研究对于分子生物学相关指标的研究,具有下列几个方面的显示意义:(1)能够为胃癌的分子诊断学提供新的研究方向;(2)能够为揭示胃癌的发病原因提供基础,并为后续临床药理学实验提供治疗靶点。
分子生物学水平的异常近年来被认为是影响恶性肿瘤发生的核心因素,分子水平的表达调控异常,增加了癌细胞过度扩增的风险,导致癌细胞的正常分化或者促凋亡过程明显失常[11-12]。Bag-1作为抗凋亡家族成员,其对于癌细胞细胞周期的影响,促进了癌细胞的增殖速度的提高,降低的了细胞程序性凋亡的发生,并减少了癌细胞的凋亡比例。Bag-1对于癌细胞分化成熟的抑制作用,提高了癌细胞对于血管内皮或者淋巴管内皮的粘附能力,对于恶性肿瘤的进展具有一定的促进作用[13-16]。近年来相关基础理论方面的研究也提示,Bag-1不仅能够影响癌细胞的凋亡,同样可以在干预细胞肿瘤相关蛋白的转录翻译、癌细胞的变形能力,降低消化系统上皮细胞排列的极性等方面发挥作用[17-19]。回顾国内外已有的相关临床研究[20-23],部分研究探讨了Bag-1的在胃癌患者中的流行病学数据,特别是对于相关异常阳性表达的分析,但缺乏对于Bag-1与胃癌患者临床预后的关系研究。
本次研究发现,在胃癌患者中存在明显的Bag-1蛋白表达,提示Bag-1蛋白与胃癌的发生发展中可能起到一定作用,Bag-1蛋白的高表达能够从下列几个方面促进胃上皮细胞的恶性肿瘤的发生[24-26]:(1)Bag-1蛋白抑制了癌细胞的凋亡,胃癌癌细胞凋亡诱导因子a的表达明显下降;(2)Bag-1蛋白影响到了癌细胞的分化成熟功能,低分化或者异常分化水平的癌细胞比例明显上升。贾静等[27-28]研究者在探讨了123例样本量的胃癌患者的蛋白水平的相关因子改变后发现,在胃腺癌或者鳞癌患者中,Bag-1蛋白的阳性表达率均可上升25%以上,并且病程越长、病情进展速度越快的患者相关指标阳性表达率也明显越高。临床分期较晚或者发生了明显的淋巴结转移的患者中,Bag-1蛋白的表达阳性率往往较高,这主要可以从下列几个方面进行理解[29-30]:(1)Bag-1蛋白提升了癌细胞粘附淋巴结内皮细胞的能力,从而提高了癌细胞从淋巴结转移的风险;(2)Bag-1蛋白能够增加癌细胞对于临床正常胃壁组织的浸润,特别是增加了癌细胞对于远处器官的侵袭风险,增加了临床分期。但本次研究并未发现Bag-1蛋白的表达与胃癌患者CEA水平、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度等的关系,提示Bag-1蛋白对于胃癌患者的肿瘤起源部位或者肿瘤细胞的分化调控的影响并不大。组合相关蛋白表达与患者临床预后的关系研究发现,胃癌患者Bag-1蛋白的阳性表达能够影响其3年生存率。
本次研究的创新性在于探讨了蛋白水平表达与患者生存预后的关系。综上所述,胃癌组织中的Bag-1蛋白高表达,同时与患者的临床病理特征等因素密切相关。
 
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